• 生物活性

靶点及简介 ：glycogen synthase kinase 3 (GSK-3) inhibitor,

Laduviglusib trihydrochloride (CHIR-99021 trihydrochloride; CT99021 trihydrochloride) 是一种高效且选择性的 GSK-3α/β 抑制剂，IC50 分别为 10 nM 和 6.7 nM。它可快速降低血糖，减轻体内情绪相关行为，是研究 2 型糖尿病胰岛素抵抗的宝贵工具。

体外研究

    CHIR 99021抑制人GSK-3β,Ki值为9.8 nM [1]。 CHIR 99021是一种小有机分子,通过竞争其ATP结合位点来抑制GSK3α和GSK3β。体外激酶检测显示CHIR 99021特异性抑制GSK3β(IC50 = ~5 nM)和GSK3α(IC50 = ~10 nM),对其他激酶的影响很小[2]。在CHIR-99021存在下,ES-D3细胞的存活率在2.5μM时降低24.7％,在5μM时降低56.3％,在7.5μM时降低61.9％,在10μMCHIR-99021时降低69.2％,IC50为4.9μM [3]。

体内研究

    在ZDF大鼠中,单次口服剂量的CHIR 99021(16mg/kg或48mg/kg)迅速降低血浆葡萄糖,给药后3-4小时最大降低近150mg/dl [1]。在照射前4小时给予CHIR99021(2mg/kg)一次,在14.5Gy腹部照射(ABI)后显着提高存活率。 CHIR99021处理显着阻断了隐窝细胞凋亡和p-H2AX +细胞的积累,并改善了隐窝再生和绒毛高度。 CHIR99021治疗通过阻断细胞凋亡来增加Lgr5 +细胞存活率,并且有效地防止Olfm4,Lgr5和CD44的减少早在4小时[4]。

激酶实验

    通过使用其His或Glu标签从SF9细胞中纯化激酶。纯化Glu标记的蛋白质，纯化His标记的蛋白质。激酶测定在96孔板中用适当的肽底物在300μL反应缓冲液中进行（50mM Tris-HCl，pH 7.5,10mM MgCl 2,1mM EGTA，1mM二硫苏糖醇，25mMβ-甘油磷酸盐，1mM的变化） NaF和0.01％牛血清白蛋白）。肽的Km值为1至100μM。将CHIR 99021或CHIR GSKIA加入3.5μLMe2SO中，然后加入ATP至终浓度为1μM。温育后，将三份100μL等分试样转移至含有100μL/孔50μMATP和20mM EDTA的Combiplate 8平板。 1小时后，用磷酸盐缓冲盐水冲洗孔5次，填充200μL闪烁液，密封，30分钟后在闪烁计数器中计数。所有步骤均为室温。抑制百分比计算为100×（抑制剂 - 无酶对照）/（Me2SO对照 - 无酶对照）[2]。

细胞实验

    使用MTT测定法在暴露于不同浓度的GSK3抑制剂三天后测定小鼠ES细胞的存活力。 MTT活性的降低是一种可靠的基于代谢的测试，用于量化细胞活力;这种减少与细胞活力的丧失相关。将2,000个细胞在含有LIF的ES细胞培养基中的明胶包被的96孔板上接种过夜。第二天，将培养基更换为不含LIF且血清浓度降低的培养基，并补充0.1-1μMBIO，或1-10μMSB-216763，CHIR-99021或CHIR-98014。不含GSK3抑制剂或DMSO的基础培养基用作对照。所有测试条件一式三份进行分析[3]。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Ring DB, et al. Selective glycogen synthase kinase 3 inhibitors potentiate insulin activation of glucose transport and utilization in vitro and in vivo. Diabetes. 2003 Mar;52(3):588-95.

[2]. Bennett CN, et al. Regulation of Wnt signaling during adipogenesis. J Biol Chem. 2002 Aug 23;277(34):30998-1004.

[3]. Naujok O, et al. Cytotoxicity and activation of the Wnt/beta-catenin pathway in mouse embryonic stem cells treated with four GSK3 inhibitors.BMC Res Notes. 2014 Apr 29;7:273.

[4]. Wang X, et al. Pharmacologically blocking p53-dependent apoptosis protects intestinal stem cells and mice from radiation. Sci Rep. 2015 Apr 10;5:8566.

• 溶解度及制备方案
  

  浓度/溶剂体积/质量	1 mg	5 mg	10 mg
  1 mM	1.7400 mL	8.6999 mL	17.3998 mL
  5 mM	0.3480 mL	1.7400 mL	3.4800 mL
  10 mM	0.1740 mL	0.8700 mL	1.7400 mL
  50 mM	0.0348 mL	0.1740 mL	0.3480 mL