• 生物活性

靶点及简介 ：A potent proteasome inhibitor，MG132 可激活自噬并诱导肿瘤细胞的凋亡。MG132 (Z-Leu-Leu-Leu-al)是一种具有细胞透性的蛋白酶体和calpain抑制剂，IC50分别为100 nM和1.2 μM。

体内研究：

MG-132给药有效恢复mdx小鼠骨骼肌纤维中肌萎缩蛋白，β-营养不良聚糖蛋白，α-营养不良聚糖蛋白，和α-肌聚糖蛋白的表达水平和血浆膜定位，减少肌肉膜损伤，并改善肌肉萎缩症的组织病理学信号。[7] MG-132治疗通过下调肌肉特异性泛素连接酶atrogin-1/MAFbx 和MuRF-1 mRNA，显著减少小鼠体内固定化诱导的骨骼肌萎缩。

体外研究：

MG-132抑制20S 蛋白酶体ZLLL-MCA降解活性，IC50为100 nM，比ZLLal(IC50为110 μM)有效1000多倍。MG-132也会抑制钙蛋白酶，IC50 为1.2 μM。MG-132在20 nM的最佳浓度下诱导PC12细胞中神经突增生，表现出高于ZLLal 500倍的效能。[1] MG-132 (10 μM) 通过抑制蛋白酶体介导的IκBα降解，有效抑制A549细胞中TNF-α诱导的NF-κB活化，白介素-8 (IL-8)基因转录，和IL-8蛋白质释放。[2] MG-132处理通过抑制26S蛋白酶体，有效诱导p53依赖性KIM-2细胞凋亡。[3]不同于BzLLLCOCHO或PS-341，MG-132处理对26S蛋白酶体的糜蛋白样(CT-L)和肽谷氨酰基肽水解(PGPH)活性抑制较弱，而相对于BzLLLCOCHO，MG-132能够更有效诱导多发性骨髓瘤细胞(U266 和OPM-2)的细胞凋亡。[4] MG-132 (1 μM)通过激活AP-1家族成员c-Fos和 c-Jun，使TRAIL抗性前列腺癌细胞敏感，这反过来抑制抗凋亡分子c-FLIP(L)。[5] MG-132显著增强肌醇六磷酸(IP6) 的作用以降低PC3 和DU145雄激素非依赖性前列腺癌(AIPCa)细胞系的细胞代谢活性。

激酶实验：    

[1]MG-132对20S蛋白酶体抑制活性的测定:

20S蛋白酶体抑制试验的反应混合物包含0.1 M Tris-乙酸，pH 7.0，20S 蛋白酶体，MG-132，和25 μM底物，溶解于二甲基亚砜，终体积为1 mL。在37 °C下培养15分钟后，加入pH 9.0的0.1 mL 10% SDS 和0.9 mL 0.1M Tris 乙酸盐停止反应。测量反应产物的荧光。为测定对20S蛋白酶体的IC50，试验混合物中包含不同浓度的MG-132。

细胞实验：    

[3]Cell lines: KIM-2，HC11，和 ES

Concentrations: 溶解于DMSO，终浓度为~25 μM

Incubation Time: 24 和 48小时

Method:

细胞在不同浓度的MG-132下暴露24，和48小时。上清液和单层细胞通过离心采集，并固定在含70%乙醇的PBS中，用吖啶橙着色。等体积细胞和吖啶橙(5 mg/mL的PBS溶液)在显微镜载玻片上固定，并通过荧光显微镜检测。对于膜联蛋白V分析，细胞通过离心采集，并用膜联蛋白V和碘化丙啶着色。对于细胞分析，细胞在PBS中于室温下再水化10分钟，随后用碘化丙啶(5 mg/mL)着色。所有样品使用Coulter Epics XL流式细胞分析仪分析。

动物实验：    

[7]Animal Models: 雄性 mdx (C57BL/10ScSn DMD mdx) 小鼠

Dosages: ~10 μg/kg/day

Administration: 注射

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

• [1] Tsubuki S, et al. J Biochem, 1996, 119(3), 572-576.
• [2] Fiedler MA, et al. Am J Respir Cell Mol Biol, 1998, 19(2), 259-268.
• [3] MacLaren AP, et al. Cell Death Differ, 2001, 8(3), 210-218.

• [4] Crawford LJ, et al. Cancer Res, 2006, 66(12), 6379-6386.
• [5] Li W, et al. Cancer Res, 2007, 67(5), 2247-2255.
• [6] Diallo JS, et al. Br J Cancer, 2008, 99(10), 1613-1622.
• [7] Bonuccelli G, et al. Am J Pathol, 2003, 163(4), 1663-1675.
• [8] Caron AZ, et al. BMC Musculoskelet Disord, 2011, 12:185.
• [9] Harhouri K, et al. EMBO Mol Med. 2017, 9(9):1294-131

• 溶解度及制备方案
  溶解度
  

  DMSO	95 mg/mL (199.74 mM)
  Ethanol	95 mg/mL (199.74 mM)
  Water	Insoluble

  制备储备液

  Concentration / Solvent Volume / Mass	1 mg	5 mg	10 mg
  1 mM	2.10 mL	10.51 mL	21.02 mL
  5 mM	0.42 mL	2.10 mL	4.20 mL
  10 mM	0.21 mL	1.05 mL	2.10 mL
  50 mM	0.04 mL	0.21 mL	0.42 mL

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