• 生物活性

靶点及简介 ：

A fluorescent probe used as an indicator of peroxynitrite formation

H2DCFDA是可渗透细胞，用于检测细胞内活性氧 (ROS) 的探针。H2DCFDA可以用于细菌活性氧（ROS）产生的测定。

体外研究

    通过流式细胞术分析H2DCFDA探针氧化表明，difESCs中ROS的基础水平比胚胎干细胞（ESC）大约6-7倍。 H2DCFDA和DCFDA探针都以其初始形式是非荧光的，但它们在细胞内经历多步转化，导致荧光产物二氯荧光素（DCF）的形成。这两种探针之间的唯一区别是H2DCFDA的转化涉及氧化。因此，与DCFDA探针相关的荧光相反，H2DCFDA处理的细胞的荧光取决于细胞内ROS水平。令人惊讶的是，流式细胞术分析显示，ESC和负载H2DCFDA的difESC的荧光水平之间的差异接近来自DCFDA处理的细胞的信号之间的差异。后者表明ESCs中氧化H2DCFDA荧光信号低的ROS依赖性原因[1]。

激酶实验

    将H2DCFDA溶解在DMSO中以获得10mM储备溶液，并在使用前进一步稀释[1]。 ROS测量[1]为了检测细胞内ROS水平，使用ROS敏感性探针H2DCFDA。将贴壁细胞（ESC，difESC，eMSC，HeLa，U118）与PBS中的5μM染色溶液在37℃下在黑暗中孵育30分钟，然后用0.05％胰蛋白酶-EDTA溶液收获，悬浮在新鲜培养基中，并且用流式细胞仪立即分析。将对照和PHA活化的淋巴细胞重悬浮于PBS中，与5μMH2DCFDA在黑暗中于37℃温育30分钟，并立即分析。如果需要，与H2DCFDA探针一起使用荧光素染料DCFDA的ROS不敏感修饰。染色程序与H2DCFDA [1]相同。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Lyublinskaya OG, et al. Redox environment in stem and differentiated cells: A quantitative approach. Redox Biol. 2017 Aug;12:758-769.

• 溶解度及制备方案

DMSO	97 mg/mL  (199.06 mM)
Ethanol	7 mg/mL  (14.37 mM)
Water	Insoluble

储备液配制

Concentration / Solvent Volume / Mass	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	2.0522 mL	10.2608 mL	20.5217 mL
5 mM	0.4104 mL	2.0522 mL	4.1043 mL
10 mM	0.2052 mL	1.0261 mL	2.0522 mL

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  关键词：H2DCFDA, DCFH-DA; 2',7'-Dichlorodihydrofluorescein diacetate, H2DCFDA供应商, Fluorescent Dye抑制剂, 购买H2DCFDA, H2DCFDA溶解度, H2DCFDA结构式
  
  
  
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