• 生物活性

靶点及简介 ：A HIF prolyl-hydroxylase inhibitor

体外研究：

    Roxadustat显着增加HIF-1α和BNIP3的积累，导致RD后3天TUNEL阳性光感受器减少，TUNEL阳性细胞中RD后7天外核层厚度增加[1]。在缺氧和常氧条件下，Roxadustat可增加脂肪来源的间充质干细胞（ADMSCs）的分化[2]。

体内研究：

    在RD动物模型中，Roxadustat（25 mg / kg）增强线粒体自噬并减弱RD后光感受器层的视网膜组织病理学损伤[1]。

细胞实验    每2天左眼注射25mg / kg FG-4592每只大鼠的左眼，用眶后注射给予等体积的用0.9％NaCl稀释的20％DMSO作为对照。将视网膜（附着，RD后1天，3天，5天和7天）均质化并用含有50mM羟甲基（Tris） - 氨基甲烷（HCl），150mM NaCl，1％Triton X-100的缓冲液裂解， 1％脱氧胆酸钠，0.1％SDS和蛋白酶抑制剂片剂。样品在8％至12％的2-羟乙基（双） - 羟甲基（Tris）凝胶电泳上进行，并转移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜（0.2mm孔）上。用3％脱脂奶粉封闭后，将膜与一抗HIF-1α，LC3，BNIP3，自噬相关基因5（Atg5）和β-肌动蛋白一起培养过夜。然后将印迹膜在室温下与辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗一起温育60分钟。通过增强的化学发光（ECL）使免疫反应条带可视化，并用Amersham Imager 600检测。每种条件使用至少三只大鼠。

动物实验    用1％戊巴比妥钠麻醉大鼠，用0.5％托吡卡胺和0.5％盐酸苯肾上腺素滴眼液扩张瞳孔。在每只大鼠中，用30号针头将巩膜穿刺在角膜缘后约1.5mm处，特别注意避免损伤晶状体。针通过巩膜切开术缓慢地进入玻璃体腔，然后通过在周边视网膜中产生小孔而进入视网膜下腔。缓慢注射透明质酸钠（10mg / mL）直至几乎三分之二的神经感觉视网膜从下面的RPE脱离。通过手术显微镜确认每只大鼠的RD。产生RD的泡沫并保持基本稳定7天。除引入视网膜下注射器和注射透明质酸钠外，所有程序步骤均在对照组的左眼上进行。使用总共102只大鼠，并且所有动物实验每组包含至少三只大鼠。将Roxadustat溶于20％二甲基亚砜（DMSO）中并用0.9％氯化钠（NaCl）稀释。每2天向每只大鼠的左眼眼睛注射25mg / kg Roxadustat，用眶后注射给予等体积的用0.9％NaCl稀释的20％DMSO作为对照。在眼眶后注射后4至6小时选择所有检测时间点。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Liu H, et al. Prolyl-4-Hydroxylases Inhibitor Stabilizes HIF-1α and Increases Mitophagy to Reduce Cell Death After Experimental Retinal Detachment. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2016 Apr 1;57(4):1807-15.

[2]. Yu Y, et al. Hypoxia enhances tenocyte differentiation of adipose-derived mesenchymal stem cells by inducing hypoxia-inducible factor-1α in a co-culture system. Cell Prolif. 2016 Apr;49(2):173-84.

• 溶解度及制备方案
  

  DMSO	70 mg/mL  (198.67 mM)
  Water	Insoluble
  Ethanol	Insoluble

  Preparing Stock Solutions

  Concentration / Solvent Volume / Mass	1 mg	5 mg	10 mg
  1 mM	2.84 mL	14.19 mL	28.38 mL
  5 mM	0.57 mL	2.84 mL	5.68 mL
  10 mM	0.28 mL	1.42 mL	2.84 mL
  50 mM	0.06 mL	0.28 mL	0.57 mL