• 生物活性

靶点及简介 ：Chk2 inhibitor,potent and highly selective

Chk2 Inhibitor II (BML-277) 是一种Chk2的ATP竞争性抑制剂，IC50为15 nM。它对Chk2的选择性比对Chk1和Cdk1/B激酶高1000倍以上。Chk2 Inhibitor II (BML-277) 剂量依赖性地保护人CD4(+)和CD8(+)T细胞免受电离辐射导致的凋亡。

体外研究：

    BML-277是Chk2的ATP竞争性抑制剂，其剂量依赖性地保护人CD4 +和CD8 + T细胞免于由于电离辐射引起的细胞凋亡。 BML-277以剂量依赖性方式有效地从辐射诱导的细胞凋亡中拯救两种T细胞群，观察到的EC50为3-7.6μM。辐射防护所需的BML-277浓度与chk2抑制的生化测量一致。提供Chk2的ATP的Km确定为99μM并且BML-277的Ki为37nM，并且假设细胞内ATP浓度为10mM，预期5μM浓度的BML-277将产生42％的抑制。细胞内chk2 [1]。

激酶实验

    chk2抑制剂的活性通过将抑制性化合物与重组全长chk2：5nM重组人Chk2,50mM HEPES（pH7.4），100mM NaCl，10mMMgCl2,25μM合成肽底物（生物素-SGLYRSPSMPENLNRPR， 1μMATP，50μCi/ mL [γ-33P] ATP和蛋白酶抑制剂混合物。将反应混合物在37℃下孵育3小时，并在与琼脂糖珠缀合的链霉抗生物素蛋白上捕获肽底物。琼脂糖珠用pH7.4的磷酸盐缓冲盐水中的0.1％Tween-20溶液反复洗涤。通过测量不同BML-277浓度（6.25,12.5,25,50,100和200nM）的酶活性。放射性磷酸盐通过闪烁计数与底物肽结合。在动力学实验中，ATP浓度变化，而未标记和[γ-33P]标记的ATP之间的比例保持恒定。通过加入50mM冷ATP，在不同时间点停止反应和样品在进一步加工过程中保持在冰上[1]。

细胞实验

    为了确定Chk2抑制剂的辐射防护作用，将纯化的T细胞以每孔100000个细胞在BML-277（102.5nM，1μM，100.5μM，10μM和101.5μM）或载体（DMSO）中以不同浓度孵育。在96孔带状槽中保持1小时。然后将细胞以3.65Gy / min的剂量率从137Cs源暴露于0或10Gyγ射线照射剂量，然后再返回培养箱中24小时。根据制造商的方案，细胞用膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶染色。用FACSCalibur FACS机器定量细胞凋亡和存活细胞。数据报告为恢复百分比 - 或来自治疗组的幸存者数减去照射对照组中存活的细胞数除以未治疗对照组中存活细胞的数量[1]。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Arienti KL, et al. Checkpoint kinase inhibitors: SAR and radioprotective properties of a series of 2-arylbenzimidazoles. J Med Chem. 2005 Mar 24;48(6):1873-85

• 溶解度及制备方案

DMSO	72 mg/mL   (197.91 mM)
Ethanol	21 mg/mL   (57.72 mM)
Water	Insoluble

制备储备液

浓度  溶剂体积   质量	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	2.7488 mL	13.7438 mL	27.4876 mL
5 mM	0.5498 mL	2.7488 mL	5.4975 mL
10 mM	0.2749 mL	1.3744 mL	2.7488 mL
50 mM	0.0550 mL	0.2749 mL	0.5498 mL

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