• 生物活性

靶点及简介 ：DNA-PK inhibitor，KU-57788 是一种有效的，选择性的 DNA-PK 抑制剂，在无细胞试验中IC50为14 nM，也会抑制 mTOR 和 PI3K，对应的IC50值分别为1.7 μM和5 μM。它可降低NHEJ的频率，而增强Cas9介导DNA剪接后发生的同源重组修复率。

体外研究：

    无毒浓度0.3μM的NU7441在用低LET和高LET辐射照射的非小细胞肺癌细胞中诱导放射增敏，并且在照射的细胞中未显示双链断裂修复抑制。 NU7441（3μM）显示持续的γ-H2AX信号显着增加。 NU7441（0.3μM）引起显着的G2 / M阻滞和DNA片段化的显着增加，并增强辐照的H1299细胞中的细胞衰老[1]。 NU7441（0.5至10μM）剂量和时间依赖性地抑制肝癌HepG2细胞的生长。 NU7441减少肝癌细胞中的pDNA-PKcs（S2056）蛋白表达。此外，NU7441和60CoγIR的双重治疗会影响DNA损伤的修复[2]。 NU7441在BRD4中是溶剂暴露的，这种抑制剂可归类为I型BRD抑制剂[4]。 NU7441降低了NHEJ的频率，同时提高了Cas9介导的DNA裂解后HDR的发生率[5]。

体内研究

    肺癌细胞用低LET和高LET辐射照射，并且在照射的细胞中不显示双链断裂修复抑制。 KU-57788（3μM）显示持续的γ-H2AX信号显着增加。 KU-57788（0.3μM）引起显着的G2 / M阻滞和DNA片段化的显着增加并且增强辐射的H1299细胞中的细胞衰老[1]。 KU-57788（0.5至10μM）剂量和时间依赖性地抑制肝癌HepG2细胞的生长。 KU-57788减少肝癌细胞中的pDNA-PKcs（S2056）蛋白表达。此外，KU-57788和60CoγIR的双重治疗会影响DNA损伤的修复[2]。 KU-57788弱抑制BRD4和BRDT，IC50分别为1μM和3.5μM。 KU-57788在BRD4中是溶剂暴露的，这种抑制剂可归类为I型BRD抑制剂[4]。 KU-57788降低了NHEJ的频率，同时提高了Cas9介导的DNA切割后HDR的发生率[5]。

激酶实验

    使用StepOnePlus实时PCR系统通过DSF评估化合物对BRD4-1和BRDT-1的抑制活性。纯化的BRD4-1（4μM终浓度; 10 mM HEPES（pH7.5），100 mM NaCl和1 mM DTT）和BRDT-1（4μM终浓度; 50 mM磷酸盐（pH7.4），100 mM在96孔板中一式四份地测定NaCl和1mM DTT。加入抑制剂至终浓度为100μM和2％DMSO。蛋白质热移位染料（1：8000）用作荧光探针，并使用ROX Reporter通道（620nm）测量荧光。通过对热循环仪进行编程以使用0.2℃增量和每增量10秒的温育将温度从25℃升高至99℃来研究蛋白质稳定性。使用Protein Thermal Shift Software（v.1.1）中的Boltzmann方程计算转变曲线/熔化温度（Tm）的拐点。 JQ1（+）和dinaciclib分别用作BRD4-1的强和弱结合物的对照。通过使用DMSO对照孔作为参考来计算ΔTm。

细胞实验

    将HepG2细胞（每孔4000个）在96孔板中培养24小时。一旦细胞完成附着，将0.1μM，1μM，5μM和10μM的KU-57788加入培养基中。在KU-57788处理12小时后，将10％CCK-8溶液加入培养基中，并继续培养2小时。通过光谱仪测定OD 450值，并分析结果以测量细胞生长。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Sunada S, et al. Nontoxic concentration of DNA-PK inhibitor NU7441 radio-sensitizes lung tumor cells with little effect on double strand break repair. Cancer Sci. 2016 Sep;107(9):1250-5

[2]. Yang C, et al. NU7441 Enhances the Radiosensitivity of Liver Cancer Cells. Cell Physiol Biochem. 2016;38(5):1897-905

[3]. Hardcastle IR, et al. Discovery of potent chromen-4-one inhibitors of the DNA-dependent protein kinase (DNA-PK) using a small-molecule library approach. J Med Chem. 2005 Dec 1;48(24):7829-46

[4]. Ember SW, et al. The acetyl-lysine binding site of bromodomain-containing protein 4 (BRD4) interacts with diverse kinase inhibitors. ACS Chem Biol. 2014 Feb 25.

[5]. Robert F, et al. Pharmacological inhibition of DNA-PK stimulates Cas9-mediated genome editing. Genome Med. 2015 Aug 27;7:93

• 溶解度及制备方案

DMSO (50ºC 水浴)	5 mg/mL   (12.09 mM)
Water	Insoluble
Ethanol	Insoluble

• 制备储备液
  

  Concentration / Solvent Volume / Mass	1 mg	5 mg	10 mg
  1 mM	2.42 mL	12.09 mL	24.18 mL
  5 mM	0.48 mL	2.42 mL	4.84 mL
  10 mM	0.24 mL	1.21 mL	2.42 mL
  50 mM	0.05 mL	0.24 mL	0.48 mL

  
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