• 生物活性

靶点及简介 ：ALK inhibitor,potent and ATP-competitive，Alectinib (CH5424802) 是一种有效,选择性和可口服的 ALK 抑制剂,IC50 为1.9 nM。

Alectinib是一种有效的ALK抑制剂，在无细胞试验中IC50为1.9 nM，对L1196M突变型敏感，对ALK比PF-02341066， NVP-TAE684和PHA-E429选择性高。

体外研究

    Alectinib(CH5424802)可阻止表达EML4-ALK的NCI-H2228 NSCLC细胞中ALK的自磷酸化,Alectinib也可显着抑制STAT3和AKT的磷酸化,但不会导致ERK1/2的磷酸化[1]。 Alectinib(CH5424802)对KARPAS-299具有高激酶选择性和强抗增殖活性,IC50值为3 nM [2]。

体内研究

    在NCI-H2228模型中,每日一次口服Alectinib(CH5424802)导致剂量依赖性肿瘤生长抑制(ED50 = 0.46mg/kg)和肿瘤消退。 20mg/kg Alectinib的治疗显示肿瘤快速消退(168％肿瘤生长抑制; p <0.001),治疗11天后(第28天)任何小鼠的肿瘤体积<30mm 3,维持有效的抗肿瘤作用在整个4周的无药期内,肿瘤再生长不会发生[1]。在小鼠中建立的ALK融合基因阳性NSCLC异种移植模型中,以20mg/kg口服施用Alectinib(CH5424802)显示出显着的肿瘤消退而没有体重减轻[2]。 60mg/kg的Alectinib(Alectinib)引起针对EML4-ALK阳性NCI-H2228异种移植模型的肿瘤消退,并降低该模型中磷酸化ALK的水平。此外,在剂量水平高达60mg/kg CH5424802的小鼠中,没有体重减轻,外周血细胞计数没有显着变化,天冬氨酸氨基转移酶或丙氨酸氨基转移酶没有升高,并且电解质没有实质性变化。以60mg/kg口服施用CH5424802 4天导致在发光信号中观察到显着的肿瘤消退[3]。

激酶实验

    通过使用时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）测定或荧光偏振（FP）测定检查它们在Alectinib存在下磷酸化各种底物肽的能力来评估除MEK1和Raf-1之外对每种激酶的抑制能力。 。通过在Alectinib存在下通过重组ERK2蛋白磷酸化底物肽来定量分析对MEK1的抑制活性。通过检测激酶在Alectinib存在下磷酸化MEK1的能力来评估对Raf-1的抑制活性[1]。

细胞实验

    将细胞在96孔板中培养过夜，并与各种浓度的Alectinib一起孵育指定的时间。对于球状细胞生长抑制测定，将细胞接种在球状体板上，孵育过夜，然后用Alectinib处理指定的时间。通过CellTiter-Glo发光细胞活力测定法测量活细胞。使用Caspase-Glo 3/7检测试剂盒[1]评估Caspase-3/7测定。

动物实验

    小鼠[1]细胞系在SCID或裸鼠中作为sc肿瘤生长。当肿瘤达到~250或~350mm 3时，开始治疗实验（第0天）。将小鼠随机分配至治疗组以接受载体或Alectinib（口服，qd）指定的持续时间。载体的最终浓度为0.02N HCl，10％DMSO，10％Cremophor EL，15％PEG400和15％HPCD（2-羟丙基-β-环糊精）。测量肿瘤块的长度（L）和宽度（W），并将肿瘤体积（TV）计算为：TV =（L×W2）/ 2。使用下式计算肿瘤生长抑制：肿瘤生长抑制= [1-（T-T0）/（C-C0）]×100。 ED50由最终实验日的肿瘤生长抑制值计算。大鼠[3]在向大鼠单次口服施用1mg / kg的14C-标记的Alectinib（Alectinib）后4至168小时的不同时间点制备血浆和脑（脑和小脑）样品。通过液体闪烁计数器测定血浆中的放射性浓度，并使用定量全身自体记录量化脑中的放射性浓度。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Sakamoto H, et al. CH5424802, a selective ALK inhibitor capable of blocking the resistant gatekeeper mutant. Cancer Cell. 2011, 19(5), 679-690.

[2]. Kinoshita K, et al. Design and synthesis of a highly selective, orally active and potent anaplastic lymphoma kinase inhibitor (CH5424802). Bioorg Med Chem. 2012, 20(3), 1271-1280.

[3]. Kodama T, et al. Antitumor activity of the selective ALK inhibitor alectinib in models of intracranial metastases. Cancer Chemother Pharmacol. 2014 Nov;74(5):1023-8.

[4]. Miyazaki M, et al. The p53 activator overcomes resistance to ALK inhibitors by regulating p53-target selectivity in ALK-driven neuroblastomas. Cell Death Discov. 2018 May 10;4:56.

• 溶解度及制备方案
  

浓度/溶剂体积/质量	1mg	5mg	10mg
1 mM 5 mM 10 mM	2.07mL 0.41mL 0.21mL	10.36mL 2.07mL 1.04mL	20.72mL 4.14mL 2.07mL

• 
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