• 生物活性

靶点及简介 ：

MET inhibitor
Merestinib (LY2801653) 是一种II型 ATP 竞争性的 MET 酪氨酸激酶抑制剂,Ki 为 2 nM。

体外研究：
Merestinib(LY2801653)显示出对MET途径依赖性细胞散射和细胞增殖的影响。 Merestinib(LY2801653)在HGF刺激的H460细胞中抑制MET自磷酸化的平均IC50值(n = 6次测定)为35.2±6.9nM,S114细胞中MET自磷酸化的IC50为59.2nM。使用MET变体进行转染可以提高生长因子的独立性,Merestinib(LY2801653)可以抑制这些MET变体克隆的生长,其IC50范围从3倍强效(V1092I)到效力低6倍(L1195V)。用MET野生型序列抑制细胞生长[1]。 Merestinib(LY2801653)(2,5和10μM)以剂量和时间依赖性方式减少活TFK-1和SZ-1细胞的数量,并且显着抑制TFK-1和SZ-1细胞系的伤口愈合。 Merestinib(LY2801653)以浓度依赖性方式抑制TFK-1和SZ-1细胞的细胞侵袭[2]。

体内研究：
Merestinib(LY2801653)在MET扩增(MKN45),MET自分泌(U-87MG和KP4)和MET过表达(H441)异种移植模型中显示出抗肿瘤作用;和体内血管正常化作用。 Merestinib(LY2801653)是一种II型ATP竞争性缓慢的MET酪氨酸激酶抑制剂,其药效停留时间(Koff)为0.00132 min-1,t1/2为525 min。 Merestinib(LY2801653)治疗抑制MET磷酸化,复合TED50(50％靶抑制剂量)为1.2 mg/kg,复合TED90(90％靶抑制剂量)为7.4 mg/kg [1]。与载体对照相比,Merestinib(LY2801653)(20mg/kg)显着降低TFK-1肿瘤生长。 Merestinib(LY2801653)抑制肝内和肝外CCC异种移植肿瘤的生长[2]。

细胞实验：

将H460细胞在补充有10％FBS的RPMI培养基中培养，并以20,000个细胞/孔铺板（在变成70％汇合之前）在96孔板中，并在37℃温育过夜。第二天，在用Merestinib（LY2801653）处理之前，将细胞与RPMI-1640在低血清（0.5％FBS）中孵育2小时。加入Merestinib（LY2801653）30分钟后，加入终浓度为100ng / mL的HGF。孵育10分钟后，制备细胞裂解物并定量pMET。通过计算相对于板上MIN（未刺激的）和MAX对照的抑制百分比，然后将抑制百分比值和10点剂量响应数据拟合为4参数，使用MSD活性单位确定相对IC 50值。使用ActivityBase [1]的逻辑方程。
动物实验：

将小鼠[1] S114细胞皮下植入雌性无胸腺裸鼠。对于剂量反应评估，在植入后第8天，Merestinib的给药范围为0.75mg / kg至100mg / kg（每剂量组n = 8）。在给药后2小时，收集血液样品和肿瘤并快速冷冻。对于时间过程研究，Merestinib的剂量为12 mg / kg（每个时间点n = 10）。在给药后2小时，8小时，16小时和24小时处死动物，并收集血液样品和肿瘤。使用MSD ELISA测定法在S114肿瘤裂解物中测量pMET。裂解物由粉碎的冷冻肿瘤组织制备，并用Lysing Matrix D珠粒匀浆，加入含有磷酸酶和蛋白酶抑制剂的RIPA裂解缓冲液。使用DC蛋白质测定试剂盒测定蛋白质浓度。进行pMET MSD ELISA测定。

• 验证及参考文献

参考文献：

[1]. Yan SB, et al. LY2801653 is an orally bioavailable multi-kinase inhibitor with potent activity against MET, MST1R, and other oncoproteins, and displays anti-tumor activities in mouse xenograft models. Invest New Drugs. 2013 Aug;31(4):833-44.

[2]. Barat S, et al. Targeting c-MET by LY2801653 for treatment of cholangiocarcinoma. Mol Carcinog. 2016 Jan 12.

• 溶解度及制备方案
  

  Concentration / Solvent Volume / Mass	1 mg	5 mg	10 mg
  1 mM	1.81 mL	9.05 mL	18.10 mL
  5 mM	0.36 mL	1.81 mL	3.62 mL
  10 mM	0.18 mL	0.90 mL	1.81 mL
  50 mM	0.04 mL	0.18 mL	0.36 mL