RMC-7977 实验方法步骤SOP

说明：本SOP基于RMC-7977产品特性（CAS：2765082-12-8）及相关文献制定，适用于体外细胞实验与体内动物实验，仅供科研使用，严禁用于人体及动物治疗。

一、基础信息（快速查阅）

二、细胞实验操作流程（含配液模板）

1. 试剂配制（核心步骤）

•储备液配制：取RMC-7977粉末，用DMSO配制成10 mM储备液，涡旋充分溶解，瞬时离心后分装（每管10–50 μL），-20℃避光保存。

•工作液配制：用完全培养基稀释储备液至所需浓度（推荐梯度：0.01、0.1、1、5、10 μM），现配现用，避免长时间放置。

2. 配液浓度换算表（直接填写使用）

3. 细胞培养与给药

1.细胞选择：选用RAS突变/依赖细胞系（如KRAS G12C、G12D、G12V、NRAS/HRAS突变株）。

2.常规培养：使用含10% FBS的DMEM/RPMI-1640培养基，37℃、5% CO₂培养箱中培养。

3.细胞接种：96孔板每孔接种3000–8000个细胞，置于培养箱中贴壁12–24 h（确保细胞贴壁率≥80%）。

4.给药处理：吸弃旧培养基，加入配制好的梯度浓度药物工作液，设置DMSO对照组（与药物组DMSO终浓度一致），每组3复孔，轻轻摇匀后放回培养箱。

5.孵育：持续孵育72 h后进行检测。

4. 检测方法与结果记录

三、动物实验操作流程（含给药日历）

1. 动物与模型准备

•动物品系：免疫缺陷裸鼠或C57BL/6小鼠；KPC胰腺癌基因工程小鼠（推荐用于胰腺癌相关实验）。

•模型构建：皮下异种移植瘤（接种RAS突变肿瘤细胞）或胰腺癌原位模型，建模后观察肿瘤生长，待肿瘤体积达到100–200 mm³时开始给药。

•伦理要求：遵循IACUC规范，饲养于SPF级环境，自由饮食饮水，适应环境3–5 d后开始实验。

2. 给药方案

•药物配制：用含5% DMSO+40% PEG300+5% Tween-80的生理盐水混悬RMC-7977，涡旋充分混匀，现配现用。

•给药剂量：10–30 mg/kg（根据实验需求调整），腹腔注射（i.p.），每日1次。

•给药周期：短期（10 d，观察癌前病变消退）；长期（28 d，评估肿瘤延缓与生存期）。

3. 给药日历模板（可填写）

4. 观测指标与终点处理

1.日常观测：每日记录小鼠体重、精神状态、饮食饮水情况，评估药物耐受性（无明显体重下降视为耐受）。

2.肿瘤测量：每2–3 d测量肿瘤长径和短径，按公式V = 长×宽²/2计算肿瘤体积，记录数据。

3.实验终点：

￮短期实验（10 d）：处死后取材肿瘤/胰腺，用于Western blot、IHC检测（p-ERK、Ki-67、TUNEL）。

￮长期实验（28 d）：记录小鼠无进展生存期与总生存期，终点取材进行相关检测。

5. 文献验证关键结果（参考）

•KPC胰腺癌模型：治疗后癌前病变显著减少，RAS下游信号（p-ERK）显著抑制。

•异种移植瘤模型：肿瘤生长抑制率>60%，部分肿瘤实现消退。

•耐受性：给药期间小鼠无明显体重下降及脏器毒性。

四、安全与合规提醒（必看）

1.本试剂仅限体外细胞与动物科研使用，严禁用于临床治疗、人体实验及动物治疗。

2.操作DMSO及药物时，佩戴手套、口罩、护目镜，在通风橱内进行，避免皮肤接触与吸入。

3.药物储存严格遵循-20℃避光条件，储备液避免反复冻融，配制好的工作液及时使用。

4.动物给药严格控制浓度与注射体积，避免溶剂毒性；实验废弃物按实验室危险化学品规范处理。

5.实验过程中严格记录数据，确保实验可重复。

五、应急与联系方式

产品咨询/技术支持：全国免费电话400-168-1698；邮箱info@DKM.cn