BI 2536是一种PLK1和BRD4的双重抑制剂。

BI 2536是靶向PLK1（IC₅₀=0.83 nM）和BRD4（Kd=37 nM）的双抑制剂，可下调c-Myc、诱导凋亡、抑制自噬，已进入II期临床。

以下为产品的化学属性、生物活性数据和实验方案。

产品关键信息

生物活性摘要

·靶点及简介：BI 2536是一种强效的PLK1和BRD4双重抑制剂。它对PLK1的抑制作用（IC₅₀=0.83 nM）比对PLK2和PLK3的选择性分别高出4倍和11倍。同时，它也能抑制BRD4（Kd=37 nM），并能有效下调c-Myc的表达。该化合物可诱导细胞凋亡并减弱自噬，目前已进入II期临床研究阶段。

·体外研究：

o细胞周期阻滞：在HeLa细胞中，低至10 nM的BI 2536即可导致细胞在G2/M期（4N DNA）发生积累，表明其可有效阻滞细胞周期。

o抗增殖活性广谱且高效：BI 2536的抗增殖效果非常显著。在涵盖32种不同人体癌细胞系的测试中，其半数有效浓度（EC₅₀）范围仅为2-25 nM，100 nM即可完全阻滞有丝分裂。值得注意的是，它对未转化的正常细胞（如hTERT-RPE1、HUVECs）同样有效，EC₅₀值在12-31 nM之间。

·体内研究：

o强大的抗肿瘤效果：在免疫缺陷小鼠（nu/nu）的多种人癌异种移植模型中，静脉注射（iv）40-50 mg/kg的BI 2536均表现出强大疗效。

§HCT 116结肠癌模型：每周给药两次可实现完全的肿瘤抑制（T/C值0.3%）。

§其他模型：治疗方案耐受性良好，未观察到显著的体重下降等临床症状。

实验方案要点

激酶实验

·目的：测定BI 2536对Plk1、Plk2和Plk3的抑制活性（IC₅₀）。

·操作流程：

1.体系建立：在连续稀释的抑制剂存在下，将20 ng重组激酶和10 mg酪蛋白（底物）加入最终体积为60 mL的反应体系中。

2.反应条件：体系含15 mM MgCl₂、25 mM MOPS (pH 7.0)、1 mM DTT、1% DMSO、7.5 mM ATP和0.3 μCi γ-P33-ATP，在30°C下反应45分钟。

3.终止与检测：加入125 mL冰冷的5% TCA终止反应。将沉淀转移至滤板，用1% TCA洗涤后，通过放射性法定量。

4.计算：通过剂量-反应曲线计算IC₅₀值。

细胞实验

·目的：评估BI 2536对细胞增殖的抑制效果（EC₅₀）。

·操作流程：

1.药物处理：将细胞与不同浓度（10 nM - 1 μM）的BI 2536共同孵育72小时。

2.检测：通过荧光分光光度计测量Alamar Blue染料的转化率来评估细胞生长情况。

3.计算：从剂量-反应曲线中拟合计算出EC₅₀值。

动物实验

·动物模型：雌性BomTac：NMRI-Foxn1 nu/nu裸鼠，通过皮下注射HCT 116结肠癌细胞、NCI-H460或A549肺癌细胞构建异种移植瘤模型。

·给药方案：

o时机：肿瘤体积达到约50 mm³或500 mm³时开始治疗。

o方式与剂量：通过尾静脉静脉注射（iv）指定剂量的BI 2536，给药体积为10 mL/kg体重。常用剂量范围为40-50 mg/kg。

o频率：每周一次或两次。

·评估指标：

o肿瘤体积：每周用卡尺测量三次，按公式长度×宽度²×π/6计算。

o耐受性：通过监测小鼠体重作为耐受性指标。

o统计分析：采用单侧（递减）精确Wilcoxon检验进行分析。

关键注意事项

·溶剂控制：在细胞实验中，应控制工作液中DMSO的终浓度通常低于0.1%，以避免溶剂本身对细胞产生影响。

·浓度效应：高浓度（>20 μM）的PP2可能会产生脱靶效应，抑制其他激酶，实验结果需谨慎解读。

·用途限制：该产品明确禁止用于人体或动物治疗，仅限于科研用途。