• 生物活性

靶点及简介 ：NUAK1/2 inhibitor, potent and selective

WZ4003是高特异性的NUAK kinase抑制剂，细胞试验中作用于NUAK1和NUAK2的IC50分别为20 nM和100 nM，对其他139个激酶没有显著抑制作用。

体外研究：

    在表达野生型NUAK1的HEK-293细胞中，WZ4003（3-10μM）显着抑制NUAK1介导的MYPT1磷酸化。此外，WZ4003（10μM）抑制MYPT1 Ser445磷酸化以及细胞迁移，侵袭和增殖，其程度与MEF中的敲除或NUAK1的U2OS细胞中的敲除相似[1]。 WZ4003还对L858R / T790M突变体EGFR表现出高的特异性亲和力，而对含有Ba / F3细胞的T790M的细胞IC50显着降低[2]。

激酶实验：

    纯化的GST-NUAK1和GST-NUAK1 [A195T]的体外活性使用Cerenkov计数将来自[γ-32P] ATP的放射性32P掺入Sakamototide底物肽中进行测量。反应在50μL反应体积中在30℃下进行30分钟，并通过将40μL反应混合物点在P81纸上并立即浸入50mM正磷酸中终止反应。将样品在50mM正磷酸中洗涤三次，然后用单次丙酮冲洗并风干。通过切伦科夫计数来量化激酶介导的[γ-32P] ATP向Sakamototide的掺入。一个活性单位定义为在1小时内催化1nmol [32P]磷酸盐掺入基质中的活性单位。

细胞实验：

    在96孔板中比色法进行细胞增殖测定。最初，每孔2000个细胞接种U2OS细胞，每孔接种3000个细胞用于MEF。在存在或不存在10μMHHT-01-015或WZ4003的情况下，在5天内进行增殖测定。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Banerjee S, et al. Characterization of WZ4003 and HTH-01-015 as selective inhibitors of the LKB1-tumour-suppressor-activated NUAK kinases. Biochem J. 2014 Jan 1;457(1):215-25.

[2]. Zhou W, et al. Novel mutant-selective EGFR kinase inhibitors against EGFR T790M. Nature. 2009 Dec 24;462(7276):1070-4.

• 溶解度及制备方案
  

  DMSO	7 mg/mL  (14.08 mM)
  Water	Insoluble
  Ethanol	Insoluble

制备储备液

浓度   溶剂体积    质量	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	2.0121 mL	10.0606 mL	20.1211 mL
5 mM	0.4024 mL	2.0121 mL	4.0242 mL
10 mM	0.2012 mL	1.0061 mL	2.0121 mL

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