• 生物活性

靶点及简介 ：A P38 MAPK inhibitor

SB202190 是一种有效的，选择性p38 MAPK抑制剂，作用于p38α/β2的IC50分别为50 nM/100 nM。SB 202190显著抑制内源本底和和抗Fas抗体诱导的MAPKAPK 2活性，且抑制效果呈剂量依赖性。SB 202190诱导Jurkat细胞和Hela细胞的死亡：通过激活CPP 32样半胱氨酸蛋白酶，可阻断Bcl - 2的表达。SB 202190 与重组人活性 p38 激酶的 ATP 袋结合，Kd 值为 38 nM。SB 202190 具有抗癌活性并可以挽救记忆障碍。

体外研究

    如在用GST-hsp27作为底物的免疫复合物激酶测定中所测量的，用SB 202190（SB202190）处理细胞以剂量依赖性方式显着抑制基础和抗Fas抗体诱导的MAPKAPK 2活性。 Jurkat细胞用SB202190处理或不处理。 24小时后，收获细胞，通过裂解荧光肽DEVD-AMC测量细胞提取物中CPP32样半胱天冬酶的活性，所述荧光肽DEVD-AMC是CPP32样半胱天冬酶的特异性底物。在用SB202190处理的细胞中DEVD-AMC的切割显着增加，但在对照中没有[2]。

体内研究

    在源自HCT-116的结肠直肠肿瘤中，施用SB 202190（SB202190），索拉非尼或两者的组合在外部肿瘤大小的测量方面给出类似的结果（与对照肿瘤相比，生长减少约58％）。 SB202190诱导肿瘤生长减少28％，而索拉非尼促进减少31％，而两种药物联合使肿瘤生长减少55％[3]。与模型组相比，SB202190组在Morris水迷宫隐藏平台试验中显示出明显更短的逃逸潜伏期（P <0.01），并且在探针试验期间在原始平台象限中显示更长的时间（P <0.01）。与VaD模型大鼠相比，SB202190组还显示海马神经细胞凋亡显着减少（P <0.01）以及更高（抗凋亡）Bcl-2表达和更低（促凋亡）caspase-3表达（两者均P <0.01）。总之，SB202190在永久性2-OV后阻断p38 MAPK信号通路减少了海马神经元的凋亡并挽救了空间学习和记忆缺陷[4]。

激酶实验

    进行MAPKAPK 2测定。简言之，将Jurkat细胞血清饥饿24小时，然后与或不用特异性p38抑制剂SB 202190孵育30分钟，然后用抗Fas mAb（100 ng / mL）处理2小时或单独留下，如图传说。在裂解缓冲液中收获细胞并通过离心澄清。用抗MAPKAPK 2多克隆抗体在4℃下免疫沉淀内源性MAPKAPK 2 3小时。在存在1μMATP/10μCi[γ-32P] ATP（10 Ci / mmol）和GST-hsp27作为底物的情况下，在30μL激酶缓冲液中在30℃下测定免疫复合物的活性30分钟。 。用Laemmli样品缓冲液终止反应。通过13％SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳然后进行放射自显影来分辨蛋白质。磷酸化蛋白质由PhosphorImager定量[2]。

细胞实验

    在存在或不存在半胱天冬酶抑制剂苄氧基羰基-Val-Ala-Asp（zVAD） - 氟甲基酮的情况下，使用或不使用SB202190（50μM），PD098059（50μM）处理Jurkat / neo或Jurkat / bcl-2细胞（106个细胞）持续24小时。然后在裂解缓冲液（25mM Hepes，pH 7.4,0.25％Nonidet P-40,10μg/ mL亮肽素，10μg/ mL抑肽酶，5mM EDTA，2mM二硫苏糖醇和10mM洋地黄皂苷）中收获细胞。通过离心澄清裂解物，并将上清液用于半胱天冬酶测定。在含有20μg细胞提取物，20μM荧光素肽乙酰基-Asp-Glu-Val-Asp-氨基甲基香豆素（DEVD-AMC）的反应混合物中测量半胱天冬酶活性。使用Cytofluor II荧光板读数器在激发360nm，发射460nm下测量荧光AMC产物形成[2]。

动物实验

    小鼠[3]使用雌性CD-1无胸腺裸鼠（6-8周龄）。将10×106个HT-29或10×106个HCT-116细胞皮下注射到雌性无胸腺裸CD-1小鼠的侧腹（每侧0.2mL）中。每2-3天测量肿瘤的体积。使用以下公式计算肿瘤体积：体积（mm 3）=（宽度）2×长度×0.5。当肿瘤体积达到60 mm3时，将小鼠随机分为4个治疗组（每组n≥6）：载体（对照），索拉非尼30 mg / kg / d，SB20219025μg/ kg / d，索拉非尼30 mg / kg / d加SB20219025μg/ kg / d。每天通过管饲给予索拉非尼药物治疗，腹膜内给予SB202190。处理小鼠12天，每2-3天记录肿瘤体积和体重。在治疗结束时，处死小鼠并移出肿瘤用于组织学和免疫组织化学分析。大鼠[4]使用无特定病原体（SPF）的雄性Wistar大鼠（3个月大，250±10g）。使用随机数表将60只Wistar大鼠随机分配到假手术组，VaD模型组和SB 202190组（每只20只动物）。通过双血管闭塞（2-VO）分离和结扎双侧颈动脉建立VaD大鼠模型（n = 40）。对于假手术组（n = 20）的动物，使用相同的方法分离双侧颈动脉但不结扎。恢复后，SB 202190组的动物接受脑室内（ICV）注射SB 202190，并且VaD模型和假手术组均接受ICV注射等体积0.1％DMSO。在每组中，在Morris水迷宫中检查8只大鼠以评估空间学习和记忆，处死6只大鼠并制备脑切片用于TUNEL染色和Bcl-2 / caspase-3免疫组织化学，并且处死6只大鼠并且组织匀浆。准备用于磷酸化-p38MAPK表达的Western印迹分析。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Davies SP, et al. Specificity and mechanism of action of some commonly used protein kinase inhibitors. Biochem J. 2000 Oct 1;351(Pt 1):95-105.

[2]. Nemoto S, et al. Induction of apoptosis by SB202190 through inhibition of p38beta mitogen-activated protein kinase. J Biol Chem. 1998 Jun 26;273(26):16415-20.

[3]. Grossi V, et al. Sorafenib inhibits p38α activity in colorectal cancer cells and synergizes with the DFG-in inhibitor SB202190 to increase apoptotic response. Cancer Biol Ther. 2012 Dec;13(14):1471-81.

[4]. Yang S, et al. Protective effects of p38 MAPK inhibitor SB202190 against hippocampal apoptosis and spatial learning and memory deficits in a rat model of vascular dementia. Biomed Res Int. 2013;2013:215798.

[5]. Zhang Y, et al. PP2AC Level Determines Differential Programming of p38-TSC-mTOR Signaling and Therapeutic Response to p38-Targeted Therapy in Colorectal Cancer. EBioMedicine. 2015 Nov 19;2(12):1944-56.

• 溶解度及制备方案

DMSO	66 mg/mL   (199.19 mM)
Ethanol	22 mg/mL  (66.40 mM)
Water	Insoluble

制备储备液

浓度   溶剂体积     质量	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	3.0180 mL	15.0902 mL	30.1805 mL
5 mM	0.6036 mL	3.0180 mL	6.0361 mL
10 mM	0.3018 mL	1.5090 mL	3.0180 mL
50 mM	0.0604 mL	0.3018 mL	0.6036 mL

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