• 生物活性

靶点及简介 ：3-Methyladenine (3-MA, NSC 66389) 是 PI3K 的抑制剂。它通过抑制class III PI3K广泛作为自噬 (autophagy) 的抑制剂使用。

3-Methyladenine是一种选择性PI3K抑制剂，作用于Vps34和PI3Kγ，IC50分别为25 μM和60 μM；永久抑制I型PI3K，但对III型PI3K的抑制是短暂的，也抑制自噬体的形成。3-MA对Vps34轻微的偏向性可能是由于Vps34中某个特异性的疏水环形结构可以环绕在3-MA的3-甲基基团外面造成的 。据报道对于正常培养和饥饿处理的癌细胞3-MA都能引起细胞死亡。3-MA还可以不通过抑制自吞噬来抑制细胞迁移和入侵，这表明3-MA 除了抑制自吞噬之外还有其它生物功能。现配现用.

体外研究：

3-甲基腺嘌呤在体外显示出与Vps34结合的轻微偏好，Vps34的IC50为25μM，而PtdIns3Kγ的IC50为60μM，而3-甲基腺嘌呤（10mM）可抑制所有PtdIns3Ks [1]。 3-甲基腺嘌呤（3-MA，5mM）在无葡萄糖条件和正常条件下抑制HeLa细胞中的自噬。 3-甲基腺嘌呤（2.5,5或10mM）诱导HeLa细胞中半胱天冬酶依赖性细胞死亡，并且死亡的发生与抑制自噬无关。此外，3-甲基腺嘌呤（3-MA，1 mM）显着缩短了诺考达唑诱导的前中期停滞的持续时间[2]。

体内研究：

3-甲基腺嘌呤（1.5mg / 100g，ip）处理在12和24小时减轻大鼠中牛磺胆酸钠诱导的重症急性胰腺炎（SAP）。 3-甲基腺嘌呤抑制牛磺胆酸钠诱导的SAP中胰腺腺泡细胞的自噬。 3-甲基腺嘌呤还显示对牛磺胆酸钠诱导的SAP中PI3K / Akt信号通路和NF-κB信号通路的抑制作用[3]。

细胞实验：

通过台盼蓝排除测定法测定细胞活力。在含有3-甲基腺嘌呤的培养基中培养细胞。收集粘附和漂浮的细胞并悬浮在磷酸盐缓冲盐水（PBS，pH7.4）中，最终密度为1-2×106 / mL。将等体积的0.4％台盼蓝溶液（w / v，在PBS中）加入细胞悬浮液中并充分混合。在室温下孵育3分钟后，使用血细胞计数器进行细胞计数。

动物实验：

所有大鼠禁食12小时，在手术前自由饮水。通过腹膜内（ip）注射2％戊巴比妥钠（0.25mL / 100g）麻醉后，将它们放置并固定在桌子上，常规剃毛，消毒和覆盖。以0.1mL / min的速度诱导大鼠SAP模型，在剖腹术后将新鲜制备的3.5％牛磺胆酸钠溶液（0.1mL / 100g）均匀逆行输注到胆胰管中。在假手术（SO）对照组中，用等体积的生理盐水溶液代替3.5％牛磺胆酸钠溶液。用连续的3-0-丝缝合线封闭切口，并将2mL / 100g盐水皮下注射到背部以补偿液体损失。将180只大鼠随机分为4组：（1）刺五加处理组（Aca组，n = 45），通过静脉成功建模后3小时以3.5 mg / 100 g剂量注射0.2％刺五加注射液。 caudalis曾经知道这个剂量是有效的; （2）3-甲基腺嘌呤治疗组（3-甲基腺嘌呤组，n = 45），其中大鼠在通过腹膜内途径成功建模后3小时以1.5mg / 100g的剂量注射100nmol /μL的3-甲基腺嘌呤溶液一旦知道这个剂量是有效的; （3）SAP模型组（SAP组，n = 45），其中这些大鼠在通过尾静脉成功建模3小时后接受等量的生理盐水代替刺五加注射; （4）SO组（对照组，n = 45），其中这些大鼠在通过尾静脉一次成功假手术后3小时接受等量的生理盐水代替刺五加注射液。将四组中的每组45只动物随机分成3,12和24小时亚组用于术后观察[3]。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Miller S, et al. Finding a fitting shoe for Cinderella: searching for an autophagy inhibitor. Autophagy. 2010 Aug;6(6):805-807.

[2]. Hou H, et al. Inhibitors of phosphatidylinositol 3'-kinases promote mitotic cell death in HeLa cells. PLoS One. 2012;7(4):e35665.

[3]. Wang X, et al. Acanthopanax versus 3-Methyladenine Ameliorates Sodium Taurocholate-Induced Severe Acute Pancreatitis by Inhibiting the Autophagic Pathway in Rats. Mediators Inflamm. 2016;2016:8369704.

[4]. Meng Li, et al. Alda-1 Ameliorates Liver Ischemia-Reperfusion Injury by Activating Aldehyde Dehydrogenase 2 and Enhancing Autophagy in Mice. J Immunol Res. 7 August 2018

• 溶解度及制备方案
  

  DMSO ( 50ºC水浴)	10 mg/mL (67.05 mM)
  Ethanol	10 mg/mL  (67.05 mM)
  Water ( 50ºC水浴)	4 mg/mL  (26.82 mM)

  
  储备液配制
  

  Concentration / Solvent Volume / Mass	1 mg	5 mg	10 mg
  1 mM	6.70 mL	33.52 mL	67.04 mL
  5 mM	1.34 mL	6.70 mL	13.41 mL
  10 mM	0.67 mL	3.35 mL	6.70 mL
  50 mM	0.13 mL	0.67 mL	1.34 mL

  
  
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