• 生物活性

靶点及简介 ：

Recilisib是一种辐射防护剂，可以激活细胞中AKT和PI3K的活性。

体外研究：

    Recilisib钠(高达50μM)在整个细胞周期中显示正常的细胞分布,在50μM时S期细胞数量略有减少。 Recilisib钠(100μM)的连续暴露不会导致细胞死亡。 Recilisib钠不会抑制人骨髓在任何时间点在甲基纤维素中形成集落的能力。 Recilisib钠处理不会抑制人骨髓细胞的集落形成潜力。 Recilisib钠在所有三种IR剂量下均提供人骨髓细胞的剂量依赖性保护。 Recilisib钠激活HFL细胞中AKT和GSK3α/β的磷酸化。 Recilisib钠增加HFL-1细胞和小鼠骨髓细胞中PI3K活性以响应辐射暴露。 Recilisib钠联合放射治疗可改变MAPK信号通路[1]。

体内研究

    Recilisib钠(500 mg/kg)显着提高小鼠原始骨髓髓系祖细胞的恢复和分化率。 Recilisib钠与辐射相结合可减少小鼠的CFU数量,但Recilisib钠处理的小鼠始终保持形成分化集落的能力。 Recilisib钠处理的小鼠有一个祖先细胞群,从未完全耗尽辐射[1]。

激酶实验

    使用指数生长的HFL-1或新鲜收获的鼠骨髓细胞进行PI3-激酶测定，所述鼠骨髓细胞用递增浓度的Recilisib钠处理2小时，然后用10Gy IR照射。然后将这些细胞返回培养箱2至24小时，并在HEPES pH 7.5裂解缓冲液中裂解。使用抗PI3 Kinas多克隆抗体在4℃下免疫沉淀PI-3K 2小时。将蛋白A / G PLUS-琼脂糖与免疫沉淀物在4℃下孵育8-16小时，得到的免疫沉淀物用两次HEPES pH 7.5裂解缓冲液洗涤一次，用激酶缓冲液（20mM Tris pH7.5,1mM EGTA，10mM MgCl2）洗涤一次。 ，2mM DTT，0.01％NP-40）。将L-α-磷脂酰肌醇（12.5mM）和ATP（10μM）加入到激酶缓冲液（每个样品60μL）中并在30℃下孵育30分钟。加入100μL1NHCl终止反应，加入200μLCHCl3/ CH3OH（1：1）萃取。将提取的样品涡旋，离心，并将含有磷脂的下部有机相在27℃下干燥2小时。将干燥的样品重悬于10μLPI-4-P标准品（0.5mL CHCl 3,0.5mL CH 3 OH，2.5μLHCl）中并点样在TLC板（VWR）上。将点样的板在CHCl 3 / CH 3 OH / NH 4 OH（40:40:15）中进行薄层层析。将TLC板干燥并进行放射自显影。

细胞实验

    对于细胞毒性测定，用不同浓度的Recilisib钠或载体处理细胞（1.0×10 5细胞/ mL HPGM），无需放射治疗2或24小时。洗涤细胞并使用网格培养皿接种到methocult中。通过使用Olympus IMT-2显微镜的显微镜观察，在平板接种后14天测定菌落形成单位（CFU）的总数。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1] Juan Dong, et al. Dev Biol. Autophagy participates in germline cyst breakdown and follicular formation by modulating glycolysis switch via Akt signaling in newly-hatched chicken ovaries

[2] Reza Ahmadi, et al. Eur J Med Chem. Recent applications of vinyl sulfone motif in drug design and discovery

[3] Jie Liu, et al. Exp Ther Med. miR-15b, a diagnostic biomarker and therapeutic target, inhibits oesophageal cancer progression by regulating the PI3K/AKT signalling pathway

[4] Jiechun Huang, et al. Cell Biochem Funct. Overexpression of microRNA-23a-5p induces myocardial infarction by promoting cardiomyocyte apoptosis through inhibited of PI3K/AKT signalling pathway

[5] Y Zhang, et al. Eur Rev Med Pharmacol Sci. KRAS gene silencing inhibits the activation of PI3K-Akt-mTOR signaling pathway to regulate breast cancer cell epithelial-mesenchymal transition, proliferation and apoptosis

• 溶解度及制备方案

DMSO	67 mg/mL (198.94 mM)
Ethanol	Insoluble
Water	Insoluble

Preparing Stock Solutions

Concentration/Volume/Mass	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	2.9692 mL	14.8460 mL	29.6921 mL
5 mM	0.5938 mL	2.9692 mL	5.9384 mL
10 mM	0.2969 mL	1.4846 mL	2.9692 mL
50 mM	0.0594 mL	0.2969 mL	0.5938 mL

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