• 生物活性

靶点及简介 ：Src and BCR-Abl inhibitor  

Dasatinib (BMS-354825)是 Bcr-Abl 和 Src 家族酪氨酸激酶抑制剂，抑制Abl， Src，c-Kit和c-KitD816V 的 IC50 分别为0.6，0.8，79和37 nM。Dasatinib 可诱导自噬和凋亡并具有抗肿瘤的活性。

Dasatinib是一种Src/Abl抑制剂，对生型Abl和Src激酶均有抑制作用，IC50分别为0.6 nM和0.8 nM。在抑制表达野生型Bcr-Abl或全部Bcr-Abl突变型（除了T315I）的Ba/F3增殖时，Dasatinib效果比Imatinib高很多。与Imatinib相比，Dasatinib呈2倍指数增长效力(约325倍)。Dasatinib有效抑制野生型Abl 激酶和全部突变型（除了T315I）。

体外研究：

    达沙替尼在较窄的范围内（IC50≤1.7nM）有效抑制野生型Abl激酶和除T315I外的所有突变体。与伊马替尼相比，达沙替尼（IC50：0.8 nM）对Ba / F3细胞中表达野生型Bcr-Abl的细胞的效力高出325倍[1]。

体内研究：

    在第10天开始每日用达沙替尼（50mg / kg）治疗。使用该方法，在治疗后6天（第16天，P = 0.014）观察到BCPAP原位肿瘤生长的显着抑制，其持续至第23天和与载体治疗的小鼠相比，29（P = 0.0003）[3]。达沙替尼（50 mg / kg）在大鼠中的代谢研究表明，达沙替尼是主要的循环成分，而多种代谢物在给药后4小时对剩余的40-60％的样品放射性有贡献[4]。

激酶实验：

    使用野生型和突变型谷胱甘肽S-转移酶（GST）-Ab1融合蛋白（c-Abl氨基酸220-498）的激酶测定进行了微小的改变。 GST-Abl融合蛋白在使用前从谷胱甘肽 - 琼脂糖珠中释放出来; ATP的浓度为5μM。在用于激酶自身磷酸化和体外肽底物磷酸化测定之前，立即用LAR酪氨酸磷酸酶处理GST-Abl激酶结构域融合蛋白。在30℃温育1小时后，通过加入钒酸钠（1mM）使LAR磷酸酶失活。使用磷酸酪氨酸特异性抗体4G10常规地进行比较未处理的GST-Abl激酶与去磷酸化的GST-Abl激酶的免疫印迹分析以确认酪氨酸残基和c-Abl抗体CST 2862的完全（> 95％）去磷酸化以确认GST-Abl的相等加载。激酶。 IC50测定的抑制剂浓度范围是0至5,000nM（伊马替尼和AMN107）或0至32nM（达沙替尼）。对于突变体T315I，达沙替尼浓度范围扩展至1,000nM。这些相同的抑制剂浓度用于体外肽底物磷酸化测定。在针对GST-Src激酶和GST-Lyn激酶的这些相同浓度范围内测试三种抑制剂。

细胞实验：

    将Ba / F3细胞系一式三份接种，并与升高浓度的伊马替尼，AMN107或达沙替尼一起孵育72小时。使用基于甲硫基磺酸盐的活力测定（CellTiter96 Aqueous One Solution Reagent）测量增殖。 IC50和IC90值报告为一式四份进行的三次独立实验的平均值。 IC50和IC90测定的抑制剂浓度范围为0至2,000nM（伊马替尼和AMN107）或0至32nM（达沙替尼）。对于IC 50> 2,000 nM的突变体，伊马替尼浓度范围扩展至6,400 nM。对于突变体T315I，达沙替尼浓度范围扩展至200nM。

动物实验：

    小鼠[3]使用雄性无胸腺裸鼠（25克; 5周龄）。制备达沙替尼（50mg / kg）用于在pH 3.0的80mM柠檬酸钠缓冲液中每日口服强饲（5天/周）。对于原位鼠模型，在第10天基于生物发光活性将小鼠随机化以接受药物或媒介物。在转移性小鼠模型中，小鼠接受达沙替尼或载体，如前所述，在心内注射（预处理）之前2天开始，或在随机化（治疗后）后第11天开始。大鼠[4]达沙替尼以0.5mg / kg口服0.5％甲基纤维素给予雄性Wistar-Han（WH）大鼠。自动化大鼠血液采集装置被编程为以预定间隔收集200μL血液。在每个时间点，将accusampler编程为将20μL血液直接发现两次（两个点）到DBS卡上。将剩余的160μL液体血液收集到含EDTA钠的管中。在以11,000rpm立即离心血液5分钟后获得血浆样品。将血浆样品储存在-80℃直至分析。将DBS样品在室温下干燥至少2小时并储存在干燥器中的塑料袋中直至样品分析。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. O'Hare T, et al. In vitro activity of Bcr-Abl inhibitors AMN107 and BMS-354825 against clinically relevant imatinib-resistant Abl kinase domain mutants. Cancer Res. 2005 Jun 1;65(11):4500-5.

[2]. Shah NP, et al. Dasatinib (BMS-354825) inhibits KITD816V, an imatinib-resistant activating mutation that triggers neoplastic growth in most patients with systemic mastocytosis. Blood. 2006 Jul 1;108(1):286-91.

[3]. Chan CM, et al. Targeted inhibition of Src kinase with dasatinib blocks thyroid cancer growth and metastasis. Clin Cancer Res. 2012 Jul 1;18(13):3580-91.

[4]. Shen Z, et al. Metabolite profiling of dasatinib dosed to Wistar Han rats using automated dried blood spot collection. J Pharm Biomed Anal. 2012 Aug-Sep;67-68:92-7.

[5]. Weisberg E, et al. Using combination therapy to override stromal-mediated chemoresistance in mutant FLT3-positive AML: synergism between FLT3 inhibitors, dasatinib/multi-targeted inhibitors and JAK inhibitors. Leukemia. 2012 Oct;26(10):2233-44.

[6]. Kan He, et al. Protein kinase inhibitors. Patent. US20180099960A1.

• 溶解度及制备方案
  
  

  DMSO	98 mg/mL     (200.82 mM)
  Water	Insoluble
  Ethanol	Insoluble

  制备储备液Preparing Stock Solutions

  Concentration / Solvent Volume / Mass	1 mg	5 mg	10 mg
  1 mM	2.05 mL	10.25 mL	20.49 mL
  5 mM	0.41 mL	2.05 mL	4.10 mL
  10 mM	0.20 mL	1.02 mL	2.05 mL
  50 mM	0.04 mL	0.20 mL	0.41 mL

  
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