• 生物活性

靶点及简介 ：MTOR inhibitor,potent,ATP-competitive and cell-permeable

WYE-354是一种有效的，特异性的，ATP竞争性的mTOR抑制剂，IC50为5 nM，对mTORC1/P-S6K(T389)和mTORC2/P-AKT(S473)有抑制作用，而对P-AKT(T308)无抑制作用，作用于mTOR比作用于PI3Kα和PI3Kγ选择性分别高100和500倍以上。

体外研究：

    在测量His6-S6K1 T389磷酸化的DELFIA中,WYE-354抑制重组mTOR酶,IC50为5 nM [1]。通过MTS测定分析细胞活力。用递增浓度的WYE-354(0.1,1,5和10μM)处理G-415和TGBC-2TKB细胞系24,48和72小时。在两种研究的细胞系中,WYE-354在暴露24小时后从1μM浓度开始显着降低细胞活力(P <0.001)。除了治疗72小时后的TGBC-2TKB细胞系外,在100nM的剂量下未观察到细胞活力的降低[2]。

体内研究

    在异种移植GBC肿瘤模型中评估雷帕霉素和WYE-354对肿瘤生长的影响。分别将2×106或5×106个G-415或TGBC2TKB细胞皮下移植到NOD-SCID小鼠中。当肿瘤达到100mm 3的平均体积时,用雷帕霉素或WYE354处理小鼠。雷帕霉素以10mg/kg的浓度腹膜内施用,每天施用,每周5天,持续3周,而WYE-354以50mg/kg的每日ip剂量施用,持续5天。在开始治疗后30天处死小鼠并进行尸检,包括移除整个肿瘤区域。用WYE-354处理的小鼠的平均肿瘤大小分别减少68.6％和52.4％(P <0.01; P <0.01),肿瘤重量分别减少82.9％和45.5％(P <0.01; ns)[2] ]。

激酶实验

    常规抑制剂测定在96孔板中在室温下在25μL中进行2小时，所述25μL含有6nM Flag-TOR（3.5）（估计5-10％纯度），1μMHis6-6SK和100μMATP。使用Euphospho-p70S6K T389抗体，通过DELFIA进行测定和检测。一些测定使用商业购买的一批mTOR。对于抑制剂与ATP基质竞争，mTOR激酶反应用不同浓度的ATP（0,25,50-100,200,400和800μM）与不同浓度的抑制剂组合进行。该测定包含12nM Flag-TOR（3.5），1μMHis-S6K并孵育30分钟。 DELFIA对检测结果进行了类似的检测，并进行了处理以生成双倒数图[1]。

细胞实验

    将G-415和TGBC-2TKB细胞系以每孔2×103个细胞的密度接种到96孔板上。过夜连接后，用WYE-354处理细胞。使用CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation assay以一定间隔测定活细胞数。向每个孔中加入20μLCellTiter96溶液，将板孵育2小时，然后使用多孔板读数器在490nm波长下读取每个孔的吸光度。所有测定均以一式五份进行，每次测定重复三次[2]。

动物实验

    小鼠[2]将8至12周龄的NOD-SCID小鼠分别在一侧腹部皮下注射2×106或5×106细胞的G-415或TGBC2TKB，并重悬于200μL含有PBS的小鼠中。 30％的Matrigel。当平均肿瘤达到100mm 3时，将小鼠随机分成四组，并用雷帕霉素或WYE-354及其各自的载体处理。雷帕霉素以每天10mg / kg的腹膜内（ip）剂量施用，每周5天，持续3周，而WYE-354以50mg / kg的每日ip剂量施用，持续5天。肿瘤体积估计每周两次。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Yu K et al. Biochemical, cellular, and in vivo activity of novel ATP-competitive and selective inhibitors of the mammalian target of rapamycin. Cancer Res. 2009 Aug 1;69(15):6232-40.

[2]. Weber H, et al. Rapamycin and WYE-354 suppress human gallbladder cancer xenografts in mice. Oncotarget. 2015 Oct 13;6(31):31877-88

• 溶解度及制备方案

DMSO	99 mg/mL (199.79 mM)
Ethanol	Insoluble
Water	Insoluble

Preparing Stock Solutions

Concentration/Volume/Mass	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	2.0180 mL	10.0902 mL	20.1804 mL
5 mM	0.4036 mL	2.0180 mL	4.0361 mL
10 mM	0.2018 mL	1.0090 mL	2.0180 mL
50 mM	0.0404 mL	0.2018 mL	0.4036 mL

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