• 生物活性

靶点及简介 ：HMGCR (HMG-CoA reductase) inhibitor

一种HMG-CoA reductase竞争性抑制剂，无细胞试验中Ki为0.1-0.2 nM。Simvastatin可诱导铁死亡、线粒体自噬、细胞自噬和凋亡。

体外研究

    在用于细胞测定之前，辛伐他汀需要在EtOH处理中被NaOH活化。辛伐他汀抑制小鼠LM细胞，大鼠H4II E细胞和人Hep G2细胞的胆固醇合成，IC50分别为19.3 nM，13.3 nM和15.6 nM [1]。辛伐他汀在30分钟内引起Akt丝氨酸473磷酸化的剂量依赖性增加，最大磷酸化发生在1.0μM。辛伐他汀（1.0μM）增强内源性Akt底物内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的磷酸化，抑制无血清培养基发生凋亡并加速血管结构形成[2]。辛伐他汀显示出抗炎作用，减少抗CD3 /抗CD28抗体刺激的PB衍生的单核细胞和来自类风湿性关节炎血液的滑膜流体细胞的增殖，以及10μM的IFN-γ释放。辛伐他汀（10μM）也可通过约30％的途径阻断由同源相互作用诱导的细胞介导的巨噬细胞TNF-γ释放[3]。辛伐他汀（5μM）显着降低星形胶质细胞和神经母细胞瘤细胞中ABCA1的表达，星形胶质细胞中载脂蛋白E的表达，并增加SK-N-SH细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶5和糖原合成酶激酶3β的表达[7]。

体内研究

    辛伐他汀通过口服给药抑制放射性标记的乙酸盐转化为胆固醇，IC50为0.2 mg / kg [1]。辛伐他汀（4毫克/天，口服13周）将胆固醇诱导的总胆固醇，低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的增加恢复到正常水平的兔子喂养富含动脉粥样硬化的胆固醇饮食[4]。辛伐他汀（6 mg / kg）可增加喂食含0.25％胆固醇饮食的兔子的LDL受体依赖性结合和肝脏LDL受体数量[5]。辛伐他汀不依赖于其对血浆胆固醇水平的影响而影响炎症。辛伐他汀（20 mg / kg /天）导致病变中巨噬细胞含量减少1.3倍，血管细胞粘附分子-1，白细胞介素-1β和组织因子表达减少2倍，并伴有病变增加2.1倍动脉粥样硬化饮食中食用的食蟹猴平滑肌细胞和胶原蛋白含量[6]。

激酶实验

    为了在体外评估Akt蛋白激酶活性，使用山羊多克隆抗Akt1抗体将底物（2μg组蛋白H2B或25μgeNOS肽）与从细胞裂解物中免疫沉淀的Akt一起温育。加入辛伐他汀后，激酶反应开始，最终浓度为ATP（50μM），含有10μCi的32P-γATP，二硫苏糖醇（1 mM），HEPES缓冲液（20 mM，pH 7.4），MnCl2（10 mM），MgCl2 （10mM）。在30℃温育30分钟后，在SDS-PAGE（15％）和放射自显影后观察到磷酸化的组蛋白H2B。为了估计32P掺入eNOS肽的程度，通过点样到磷酸纤维素盘式过滤器上测量每种反应混合物，并通过切伦科夫计数测量掺入的磷酸盐的量。野生型肽序列是1174-RIRTQSFSLQERHLRGAVPWA-1194，突变体eNOS肽是相同的，除了丝氨酸1179被丙氨酸取代[3]。

细胞实验

    来自四个不同供体的原代人星形胶质细胞由从合法流产的胎儿获得的组织制备。将原代人星形胶质细胞和SK-N-SH神经母细胞瘤细胞系（ATCC）接种在6孔板上，分别在37℃，5％CO 2下培养于补充有5％或8％胎牛血清的DMEM中，直至80％汇合。为了测量基线处的基因表达水平，仅洗涤细胞并制备RNA并如下所述进行测定。在从两个供体获得的原代人星形胶质细胞中测量星形胶质细胞中的基线基因表达水平。出于实验目的，将细胞在无血清条件下孵育。从四个供体获得原代人星形胶质细胞。基于初步的时间依赖性研究，48小时孵育用于所有实验。基于剂量反应研究，我们的大多数实验使用以下浓度的活性化合物进行：5μM的辛伐他汀，10μM的普伐他汀，50μM的甲羟戊酸，以及10μM的GGPP和FPP。孵育后，彻底清洗细胞以去除死细胞和细胞碎片，并准备进行进一步分析[7]。

动物实验

    猴子[1] 39只成年雄性食蟹猴最初喂食中度致动脉粥样化饮食，每卡路里含有0.28毫克胆固醇，其中16.7％来自蛋白质，45.1％来自脂质，38.1％来自碳水化合物。在使用致动脉粥样化饮食3个月后，将猴子分成3组（每组n = 13），其总血浆胆固醇（TPC），LDL-C和HDL胆固醇（HDL-C）浓度相当;这些组消耗致动脉粥样硬化饮食并接受他汀类药物（或对照）治疗15个月。对照猴子喂食致动脉粥样硬化饮食，不添加他汀类药物。 Prava处理的猴子每天添加40mg Prava / kg体重，添加到致动脉粥样化饮食中。辛伐他汀治疗的猴子每天消耗20毫克辛伐他汀/千克体重[1]。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Slater, E.E., et al. Mechanism of action and biological profile of HMG CoA reductase inhibitors. A new therapeutic alternative. Drugs, 1988. 36 Suppl 3: p. 72-82.

[2]. Kureishi, Y., et al. The HMG-CoA reductase inhibitor simvastatin activates the protein kinase Akt and promotes angiogenesis in normocholesterolemic animals. Nat Med, 2000. 6(9): p. 1004-10.

[3]. Leung BP, et al. A novel anti-inflammatory role for simvastatin in inflammatory arthritis. J Immunol. 2003 Feb 1;170(3):1524-30.

[4]. Kobayashi M, et al. Preventive effect of MK-733 (simvastatin), an inhibitor of HMG-CoA reductase, on hypercholesterolemia and atherosclerosis induced by cholesterol feeding in rabbits. Jpn J Pharmacol. 1989 Jan;49(1):125-33.

[5]. Ishida F, et al. Comparative effects of simvastatin (MK-733) and pravastatin (CS-514) on hypercholesterolemia induced by cholesterol feeding in rabbits. Biochim Biophys Acta. 1990 Feb 23;1042(3):365-73.

[6]. Sukhova GK, et al. Statins reduce inflammation in atheroma of nonhuman primates independent of effects on serum cholesterol. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2002 Sep 1;22(9):1452-8.

[7]. Weijiang Dong, et al. Differential effects of simvastatin and pravastatin on expression of Alzheimer’s disease-related genes in human astrocytes and neuronal cells. J Lipid Res. 2009 Oct; 50(10): 2095-2102.

• 溶解度及制备方案
  
  

DMSO	83 mg/mL  (198.29 mM)
Ethanol	83 mg/mL  (198.29 mM)
Water	Insoluble

储备液配制

Concentration / Solvent Volume / Mass	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	2.3891 mL	11.9454 mL	23.8909 mL
5 mM	0.4778 mL	2.3891 mL	4.7782 mL
10 mM	0.2389 mL	1.1945 mL	2.3891 mL



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