• 生物活性

靶点及简介 ：

A ROCK1 inhibitor，Y-27632 dihydrochloride 是 ATP 竞争性的 ROCK-I 和 ROCK-II 抑制剂，Ki 分别为 220 nM 和 300 nM。

体外研究：

Y-27632抑制ROCK家族的激酶比其他激酶（包括蛋白激酶C，cAMP依赖性激酶和肌球蛋白轻链激酶）强100倍。 Y-27632延长滞后时间并以浓度依赖性方式延迟BrdU标记细胞的出现，在分别用10和100μMY-27632处理的Swiss 3T3细胞中观察到约1和4小时的延迟[1] ]。 Y-27632促进脂肪组织来源的干细胞（ADSCs）的神经元分化。与1.0和2.5μMY-27632诱导组相比，神经样细胞的百分比在5.0μMY-27632诱导组中达到峰值[2]。

体内研究：

与盐水组相比，Y-27632（5和10 mg / kg）显着延长肌阵挛性抽搐的起效时间。与生理盐水组相比，Y-27632（5和10 mg / kg）显着延长阵挛性惊厥的发作时间[3]。与对照动物（SS组）相比，用二甲基亚硝胺（DMN）治疗导致大鼠体重和肝脏重量（DMN-S组）显着降低。口服Y27632（30 mg / kg）基本上可以防止这种DMN诱导的大鼠体重和肝脏重量减轻（DMN-Y组）[4]。

激酶实验:

   通过使用Lipofectamine转染，重组ROCK-1，ROCK-II，PKN或citron激酶在HeLa细胞中表达为Myc标记的蛋白，并通过使用与G蛋白偶联的9E10单克隆抗Myc抗体从细胞裂解物中沉淀。 - 琼脂糖。回收的免疫复合物与不同浓度的[32P] ATP和10mg组蛋白2型作为底物在不存在或存在各种浓度的Y-27632或Y-30141的条件下于30℃温育30分钟，总体积为30μL含有50mM HEPES-NaOH，pH 7.4,10mM MgCl 2,5mM MnCl 2,0.02％Briji 35和2mM二硫苏糖醇的激酶缓冲液。将PKCa与5μM[32P] ATP和200μg/ mL组蛋白2型作为底物孵育，在不存在或存在各种浓度的Y-27632或Y-30141的情况下，在含有50μL的激酶缓冲液中于30°C保持10分钟mM Tris-HCl，pH 7.5,0.5mM CaCl 2,5mM乙酸镁，25μg/ mL磷脂酰丝氨酸，50ng / mL 12-O-十四烷基佛波醇-13-乙酸酯和0.001％亮抑酶肽，总体积为30μL。通过添加10μL的43 Laemmli样品缓冲液终止孵育。煮沸5分钟后，将混合物在16％凝胶上进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。用考马斯亮蓝染色凝胶，然后干燥。切除对应于组蛋白2型的条带，并测量放射性[1]。

细胞实验: 

  HeLa细胞以每3.5cm培养皿3×104个细胞的密度接种。在10mM胸苷存在下，将细胞在含有10％FBS的DMEM中培养16小时。用含有10％FBS的DMEM洗涤细胞后，再培养8小时，然后加入40ng / mL的诺考达唑。在Nocodazole处理11.5小时后，加入各种浓度的Y-27632（0-300μM），Y-30141或载体，并将细胞再孵育30分钟[1]。

动物实验: 

  小鼠[3]使用体重25-30g的雄性近交瑞士白化小鼠（2-3个月大）。每周给小鼠注射亚痉挛剂量的PTZ（35mg / kg，ip）（周一，周三和周五），共注射11次。在每次PTZ注射后，观察小鼠30分钟并记录惊厥活动的发生。 30分钟后，然后给小鼠注射法舒地尔（25mg / kg，ip）或Y-27632（5mg / kg，ip）并返回其家笼，直至下一次注射。用于法舒地尔和Y-27632的对照小鼠接受盐水。大鼠[4]雄性Wistar种A大鼠（200-250g）。将DMN（1μg/ mL）用盐水（终浓度1％）稀释10倍，并且在每周的前3天腹膜内（ip）注射10mg / kg每天的DMN，持续4周。从第一次注射DMN开始，每天以30mg / kg的剂量口服给予Y27632，持续4周。 30mg / kg的剂量在几种大鼠模型中校正高血压而没有毒性。将20只大鼠随机分成4个实验组（每组n = 5），如下：（1）SS（腹腔注射生理盐水和口服生理盐水）; （2）SY（腹腔注射生理盐水和口服Y27632）; （3）DMN-S（DMN ip和口服盐水）; （4）DMN-Y（DMN ip和口服Y27632）。每周称重大鼠。在第四周结束时将它们处死并切除肝脏。另外，在处死大鼠之前立即采集血样。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Ishizaki T, et al. Pharmacological properties of Y-27632, a specific inhibitor of rho-associated kinases. Mol Pharmacol. 2000 May;57(5):976-83.

[2]. Xue ZW, et al. Rho-associated coiled kinase inhibitor Y-27632 promotes neuronal-like differentiation of adult human adipose tissue-derived stem cells.Chin Med J (Engl). 2012 Sep;125(18):3332-5.

[3]. Inan S, et al. Antiepileptic effects of two Rho-kinase inhibitors, Y-27632 and fasudil, in mice. Br J Pharmacol. 2008 Sep;155(1):44-51.

[4]. Tada S, et al. A selective ROCK inhibitor, Y27632, prevents dimethylnitrosamine-induced hepatic fibrosis in rats. J Hepatol. 2001 Apr;34(4):529-36.

• 溶解度及制备方案
  

  
  溶解度Solubility Data

  	Solvent	Max Conc. mg/mL	Max Conc. mM
  Solubility
  	DMSO	39.51	123.37
  	DMF	20.0	62.45
  	Ethanol	8.5	26.54
  	PBS (pH 7.2)	10.0	31.22
  	Water	73.34	229.0

  制备储备液

  Concentration / Solvent Volume / Mass	1 mg	5 mg	10 mg
  1 mM	3.12 mL	15.61 mL	31.22 mL
  5 mM	0.62 mL	3.12 mL	6.24 mL
  10 mM	0.31 mL	1.56 mL	3.12 mL
  50 mM	0.06 mL	0.31 mL	0.62 mL

  
  
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