Coelenterazine 400a生物活性靶点及研究应用

化合物概述

Coelenterazine 400a是一种bisdeoxy coelenterazine衍生物，在与海肾荧光素酶（Renilla luciferase，Rluc）反应后能发射出395 nm波长的蓝光。该化合物作为RLuc的专用底物，通过取代亚甲基桥的硫和氧杂原子，导致Rluc的生物发光反应发生显著的色变。

生物活性特性

Coelenterazine 400a hydrochloride提供了更高的信号分辨率，使其在生物发光共振能量转移（BRET）研究中具有重要价值。该化合物特别适用于BRET2实验方案，与发射最大波长为475 nm的coelenterazine h（用于BRET1方案）形成互补。

在应用中，Coelenterazine 400a通常与1类和3类GFP受体（包括GFP2和GFP10）配对使用。BRET2检测方法常用于评估蛋白质-蛋白质相互作用，特别是在G蛋白偶联受体信号传导研究领域。

体外研究方法

溶液制备

1. 准备10 μL浓度为1.0-5.0 mM的Coelenteramine 400a溶液
2. 准备10 μL浓度为2.01 mg/mL的Renilla luciferase（RLuc8.6-53）溶液
3. 将上述两种溶液与200 μL缓冲液混合

检测步骤

1. 使用配备液氮冷却CCD探测器的多通道光谱仪记录生物发光光谱
2. 采用定制光度计（配备光电倍增管）测定生物发光反应参数
3. 在试管中预先放入5-15 μL浓度为10 nM的Coelenteramine 400a溶液，然后注入150 μL浓度为20 μg/mL的荧光素酶溶液启动反应
4. 监测反应直至完全，计算生物发光反应量子产率
5. 使用Lineweaver-Burk图计算米氏常数（Km）和催化常数（kcat）

化学特性

CAS号： 2320429-05-6
化学名称： 6-phenyl-2,8-bis(phenylmethyl)-imidazo[1,2-a]pyrazin-3(7H)-one, monohydrochloride
分子式： C₂₆H₂₁N₃O·HCl
分子量： 427.9

溶解度： 0.5 mg/mL in DMSO，微溶于乙醇
储存条件： -20°C保存

使用建议

根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液。一旦配成溶液，建议分装保存以避免反复冻融造成的产品失效。在-80°C条件下储存时，请在6个月内使用；在-20°C条件下储存时，请在1个月内使用。为提高溶解度，可将管子加热至37°C，然后在超声波浴中震荡一段时间。

参考文献

1. Bertrand, L., et al. J. Recept. Signal Transduct. Res. 22(1-4), 533-541 (2002)
2. Galés, C., et al. Nat. Methods 2(3), 177-184 (2005)
3. Pfleger, K.D., and Eidne, K.A. Nat. Methods 3(3), 165-174 (2006)
4. Huang, Q., et al. J. Biomed. Opt. 12(5):054012 (2007)