Furimazine：高性能咪唑并吡嗪酮发光底物
Furimazine：高效的咪唑并吡嗪酮类发光底物
Furimazine是一种创新的咪唑并吡嗪酮类发光底物，与NanoLuc荧光素酶（Nluc）联合使用时，能够在哺乳动物细胞中产生极其强烈的发光信号。其发光亮度显著超越传统底物Coelenterazine-Oluc-19，达到惊人的250万倍提升。
体外研究特性
作为Coelenterazine的结构类似物，Furimazine在纯化NanoLuc酶系统中表现出优异的动力学特性。实验数据显示，该底物的表观Km值约为10μM，而最大发光强度（表观Vmax）比天然Coelenterazine高出约30倍。在表达Nluc的细胞系统中，通常在10-20μM的Furimazine浓度范围内可获得最佳信号强度。
激酶筛选实验
通过系统性的易错PCR技术，研究人员构建了多个随机突变文库进行筛选优化：
第一阶段：以Oluc-N166R为模板，构建包含4,400种变体的文库1，使用Coelenterazine进行初步筛选
第二阶段：以C1A4E为模板，构建同样规模的文库2，采用11种新型Coelenterazine类似物（包括3840、3841、3842等化合物）进行筛选，这些类似物在第2、6和8位具有特定取代基
第三阶段：在小鼠Id-X-HaloTag背景下，以经过多重突变（Q18L/K33N/F54I等）的C1A4E为模板构建文库3，同时使用Coelenterazine和腔肠素类似物进行筛选
所有筛选实验均在Freedom机器人工作站上完成，采用标准化的裂解缓冲体系和测定试剂，最终在GENios Pro光度计上进行发光信号检测。
存储液制备指南
根据不同的实验需求，Furimazine可配制为多种浓度的存储液：
- 1mg规格：2.62mLDMSO溶剂
- 5mg规格：0.52mLDMSO溶剂
- 10mg规格：0.26mLDMSO溶剂
- 1mM浓度：13.11mLDMSO溶剂
- 5mM浓度：2.62mLDMSO溶剂
- 10mM浓度：1.31mLDMSO溶剂
验证与参考文献
本产品特性已通过权威研究验证，主要参考文献： Hall MP等研究人员在《ACS Chemical Biology》2012年11月16日第7卷第11期1848-1857页发表的论文中，详细报道了这种源自深海虾的工程化荧光素酶报告系统及其新型咪唑并吡嗪酮底物的开发与应用。
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