Tofacitinib (托法替尼)：新型JAK3抑制剂的研究与应用

基本信息

通用名：Tofacitinib (CP-690550, Tasocitinib) 托法替尼碱
CAS号：477600-75-2
分子式：C₁₆H₂₀N₆O
分子量：312.37

产品特性

托法替尼是一种高效的Janus激酶抑制剂，对JAK1、JAK2和JAK3的IC₅₀值分别为112 nM、20 nM和1 nM。特别值得注意的是，该化合物对JAK3的选择性比JAK2和JAK1高出20至100倍，显示出优异的选择性抑制特性。

物理化学性质：

• 溶解度：≥15.6 mg/mL in DMSO
• 纯度：>99%
• 储存条件：粉末-20°C可保存3年，溶剂-80°C可保存1年

实验研究方案

体外研究

在结合实验中，托法替尼与JAK3和JAK2的结合Kd值分别为2.2 nM和5 nM。研究还发现该化合物与其他多种激酶存在额外结合作用，包括Camk1 (Kd=5,000 nM)和Mst2 (Kd=4,300 nM)等。

体内研究

免疫模型（小鼠）：使用雌性BALB/c小鼠，通过渗透泵持续输注溶解于PEG300的托法替尼。研究结果显示，与对照组相比，托法替尼处理可显著降低抗药物抗体（ADA）的产生，并降低抗KLH抗体滴度。参考日剂量为6.2 mg/kg，该剂量可提供超过4小时的JAK1和JAK3信号通路抑制。

关节炎模型（大鼠）：使用雌性Lewis大鼠诱导佐剂性关节炎（AIA）。将托法替尼悬浮于0.5%甲基纤维素/0.025%吐温20中，每日一次口服给药6.2 mg/kg。

激酶实验

通过竞争结合assay测定，将待测激酶与固定化的活性位点定向配体孵育，在有或无测试化合物存在下，测量激酶的结合量，以测定Kd值。

细胞实验

细胞来源：从健康供体的外周血单个核细胞（PBMC）中分离人CD4+ T细胞。

细胞处理流程：

1. 用抗CD3和抗CD28抗体激活分离的CD4+ T细胞
2. 在IL-2存在下进行细胞扩增
3. 细胞静息后，用5 nM、50 nM、500 nM的托法替尼或DMSO对照预孵育1小时
4. 使用IL-2 (1000 u/mL) 或 IL-12 (100 ng/mL) 刺激15分钟
5. 裂解细胞并通过Western blot检测STAT蛋白磷酸化水平

溶液配制方法

DMSO储备液：可在50°C水浴条件下，将化合物溶解于DMSO中，得到浓度为62 mg/mL (198.48 mM) 的澄清溶液。配制1 mM溶液时，1 mg、5 mg、10 mg产品分别需加入3.2013 mL、16.0067 mL、32.0133 mL溶剂。

注意事项：该化合物不溶于水和乙醇，建议使用DMSO作为主要溶剂。

应用说明

本品仅供科学研究使用，研究人员需根据具体实验条件对上述方案进行适当调整。托法替尼作为一种新型JAK3抑制剂，在免疫调节和炎症相关疾病研究领域具有重要的应用价值。