重磅：平替大牌 小鼠CD4+CD25+调节性T细胞磁珠分选试剂盒

现货 完美平替以下国际大牌产品

小鼠CD4+CD25+ 调节性T 细胞（Treg）分选试剂盒

专门用于从小鼠脾脏单细胞悬液中高效分选  CD4+CD25+ Treg 细胞。

本试剂盒采用两步分选策略：第一步（富集）：通过免疫磁珠去除非目标细胞，实现  CD4+ T细胞的预富集；第二步（阳性选择）：利用CD25 抗体特异性标记目标细胞，并由可解离磁珠进行捕获，随后通过  ReleaseBuffer将磁珠从细胞表面温和解离。最终获得无磁珠标记的小鼠CD4+CD25+Treg 细胞，可直接应用于下游的分子生物学与细胞生物学实验。

产品特点：

高纯度：分选获得的Treg 细胞纯度可达  90%。

高活率：分选过程温和，获得的细胞活率大于95%。

无柱分选：无需分离柱，仅使用磁力架即可完成目的细胞分离。

多细胞群体获取：通过初步富集可获得CD4+T 细胞；进一步分选后，不仅可获得CD4+CD25+Treg细胞，还可同时收集  CD4+CD25-T 细胞，便于开展后续对照实验或功能研究。

评测数据：

1.富集后CD4+   T细胞纯度检测

使用小鼠Treg 细胞分选试剂盒中CD4EnrichmentBeads 组分对小鼠脾脏  CD4+      T 细胞先进行富集。富集前后的细胞用FITC 标记的  anti-mouse CD4 抗体（克隆号  GK1.5）染色后进行流式细胞分析。结果显示，CD4+      T细胞脾脏初始占比为15.87%，富集后CD4+      T细胞纯度可达90.20%（90.58±1.89%）（图1）。

图1. 流式检测富集前后CD4+      T 细胞纯度

2.分选后CD4+CD25+  Treg 细胞和CD4+CD25-T 纯度检测

使用小鼠Treg 细胞分选试剂盒从富集后的CD4+      T 细胞分选Treg 细胞。分选前后的细胞用FITC 标记的  anti-mouse CD4 抗体（克隆号  GK1.5）和  PE标记的  anti-mouseCD25抗体（克隆

号  3C7）进行染色。结果显示，脾细胞中CD4+CD25+      Treg 细胞占比为1.73%（图2 左），分选后Treg 细胞纯度达93.04%（图2中）；同时可获得CD4+CD25-T 细胞，其纯度为90.08%（图2 右）。

图2. 流式检测分选前后CD4+CD25+    Treg 细胞纯度

3.Foxp3 表达验证

为进一步验证分选细胞的Treg 特性，采用固定/破膜后进行胞内染色，检测关键转录因子FOXP3的表达。分选前后的细胞用FITC 标记的  anti-mouse CD4 抗体（克隆号  GK1.5）PE标记

的  anti-mouse CD25 抗体（克隆号  3C7）和AlexaFluor647 标记的anti-mouseFoxp3（克隆

号  150D）染色。流式结果显示，分选后CD4+细胞占比95.24%，其中CD25+FOXP3+双阳性细胞占CD4+细胞的86.12%, 证明本试剂盒可获得具有典型Treg 表型（CD4+CD25+Foxp3+ ）的目标细胞（图3）。

图3. 分选前后CD4+CD25+Foxp3+ Treg 细胞流式染色分析

4.分选前后细胞活率分析

用小鼠Treg 细胞分选试剂盒从脾脏分选目的细胞，分选前后细胞经  7-AAD 染色后，使用流式细胞仪检测细胞活率。分选前活细胞比例为95.90%，分选后CD4+CD25+   Treg 细胞的活细胞比例为

96.49%，CD4+CD25-T 细胞的活细胞比例为96.85%，均保持高活率（图4）。

图4. 流式检测分选前后细胞活率5.分选后Treg 细胞功能分析

为评估分选所得Treg 细胞的生物学功能，将分选获得的CD4+CD25+   Treg 细胞与CD4+CD25-T 细胞进行共培养，检测其对效应T 细胞增殖的抑制能力。将CD4+CD25-细胞进行CFSE染色后，使用小鼠CD3/CD28 激活磁珠进行刺激，培养3 天。72h 后通过流式细胞术检测发现，77.55%的细胞发生增殖。而在加入CD4+CD25+   Treg 细胞（1:2）共培养条件下，增殖比例明显下降至49.55%（图5）。结果表明，本试剂盒分选获得的Treg 细胞具有免疫抑制功能，可有效抑制效应T 细胞增殖。

图5. 分选后Treg 细胞抑制功能检测